В материале даны общие рекомендации по взятию материала для исследований методом ПЦР. Просим тщательно соблюдать данные рекомендации для повышения точности исследования.

Кровь (плазма), сыворотка крови

Пробы крови (плазмы) используют при проведении качественных и количественных исследований ДНК или РНК возбудителей заболеваний человека. Взятие крови производят натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовой иглой в пробирки с К3-ЭДТА. Пробирку закрывают крышкой и аккуратно переворачивают несколько раз для полного растворения антикоагулянта.

Гепарин в качестве антикоагулянта использовать нельзя!

Образцы крови с ЭДТА можно хранить при температуре +2...+8°C в течение 1 суток для качественного и количественного определения ДНК (РНК) инфекционных агентов. Недопустимо замораживание образцов цельной крови!

Моча

Для анализа отбирают первую порцию утренней мочи в количестве не менее 20-30 мл в сухой стерильный контейнер ёмкостью 50 мл.

Такие образцы мочи можно хранить при температуре +2...+8°C в течение 1 суток; при температуре –20°C — в течение 1 недели. Допускается однократное замораживание и оттаивание материала.

Фекалии

Для ПЦР-диагностики используют пробы фекалий массой (объемом) примерно 1-3 г (1-3 мл). Пробу переносят в специальный стерильный контейнер.

Исследование ректальных мазков для ПЦР исследований неинформативно из-за низкого содержания возбудителей.

Образцы нативных фекалий можно хранить до доставки в лабораторию: при комнатной температуре — в течение 6 часов; при температуре +2...+8°C — в течение 3 суток.

Мокрота

Взятие материала осуществляют в количестве не менее 1 мл в одноразовые градуированные стерильные флаконы с широким горлом и завинчивающимися крышками объемом не менее 50 мл.

Мокроту допускается хранить до доставки в лабораторию: при комнатной температуре — в течение 6 часов; при температуре +2...+8°C — в течение 3 суток; при температуре –20°C — в течение 1 недели. Допускается однократное замораживание и оттаивание материала.

Мазки из полости носа, ротоглотки

Мазки (слизь) берут сухими стерильными ватными тампонами на пластиковой основе. Тампон вводят легким движением по наружной стенке носа на глубину 2-3 см до нижней раковины, затем тампон слегка опускают книзу, вводят в нижний носовой ход под нижнюю носовую раковину, делают вращательное движение и удаляют вдоль наружной стенки носа. После взятия материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещают в стерильную одноразовую пробирку. Пробирка в необходимых случаях может содержать соответствующую транспортную среду. Пробирку плотно закрывают крышкой.

Такие пробы могут хранится до доставки в лабораторию: при температуре +2...+8°C — в течение 3 суток; при температуре –20°C — в течение 1 недели. Допускается однократное замораживание и оттаивание материала.

В материале даны общие рекомендации по сбору материала для клинических и биохимических исследований мочи. Просим тщательно соблюдать данные рекомендации для повышения точности исследования.

Накануне сдачи анализа рекомендуется не употреблять овощи и фрукты, которые могут изменить цвет мочи (свекла, морковь и пр.), не принимать диуретики.

Перед сбором мочи производится тщательный гигиенический туалет половых органов. Женщинам не рекомендуется сдавать анализ мочи во время менструации.

Для клинических и большинства биохимических анализов мочи собирают примерно 50 мл утренней мочи в одноразовый пластиковый контейнер. Для правильного проведения исследования при первом утреннем мочеиспускании небольшое количество мочи (первые 1-2 с) нужно выпустить в унитаз, а затем, не прерывая мочеиспускания, подставить контейнер для сбора мочи, в который собрать приблизительно 50 мл мочи. Сразу после сбора мочи контейнер плотно закрывают завинчивающейся крышкой.

Для исследования экскреции микроальбумина, кальция, фосфата, оксалата, меди используется проба суточной мочи.

Первую порцию мочи после пробуждения не собирают. Сразу после мочеиспускания засекают время и, начиная со следующего мочеиспускания, собирают мочу в течение суток. 

Для сбора мочи используется контейнер с крышкой, который между мочеиспусканиями хранят на нижней полке холодильника. Консерванты в контейнер не добавляются. Объём собранной мочи измеряют с точностью 50 мл, на исследование отбирают 30-50 мл мочи в одноразовый пластиковый контейнер. В направлении на исследование указывают суточный объём мочи.

В этой статье изложены основные положения по взятию материалов для бактериологического исследования. Безусловно, мы осветили далеко не все тонкости взятия материала, но соблюдение хотя бы этих основ обеспечит лабораторию адекватным материалом, а врача — полноценными результатами бактериологического исследования.

Общие требования

Из множества важных и нужных требований особое внимание обращаем на следующие условия:

• Микроорганизм должен быть взят из зоны поражения — там где предполагается воспалительный процесс.

• В материал не должна быть занесена посторонняя флора, т.е. руки должны быть стерильными, инструмент для взятия — стерильным, желательно одноразовым.

• Условия транспортировки должны обеспечивать выживание даже капризного микроорганизма в течение всего времени транспортировки в лабораторию.

Лучшим вариантом является использование разовых систем транспортировки, содержащих одну из транспортных сред — Эймса, Стюарта или Кэри-Блейра. Каждая из этих сред выпускается в варианте с активированным углем или же без угля. Уголь необходим для сорбции токсинов, снижающих жизнеспособность микробов. Так, посевы на гонорею рекомендуется брать только в среды с углем. Биологический материал погружают в столбик среды таким образом, чтобы он не оставался на её поверхности. Среда предупреждает гибель микробных клеток, сохраняет их жизнеспособность, но в то же время препятствует размножению микроорганизмов, что исключает или существенно ограничивает преимущественный рост менее требовательных микроорганизмов при ассоциативной микрофлоре. Транспортировать и хранить взятый материал в лабораторию лучше всего при температуре 10-20°С, не подвергая сильным температурным колебаниям, прямому солнечному свету.

• Необходимо правильно и полно заполнять направления, не ограничиваясь поверхностными данными — номером пробы и Ф.И.О. Чем больше вводных данных получит врач-бактериолог, тем больше пользы принесет больному и вам его ответ. Помните, что для предотвращения загрязнения направление всегда транспортируется отдельно от материала.

• Пробы биоматериала следует брать до начала антибактериальной терапии. Если пациент уже начал прием препаратов, а посев очень хочется взять (именно хочется, поскольку диагностическая ценность в таком случае падает в разы), старайтесь делать это перед приемом очередной дозы препарата.

Техники взятия мазков для посева

Мы остановимся только на видах посевов, использующихся в поликлинических условиях.

• Материал из ран берут стерильным зондом, по возможности, из более глубоких отделов, очистив рану от отмерших тканей, т.к. верхние отделы могут содержать сапрофитную микрофлору. Взятый материал помещают в пробирку с транспортной средой.

• Мазок из зева берется натощак стерильным зондом с воспаленных участков, при налетах (по краю их) и при наличии пленок — из глубины крипт миндалин, задней стенки глотки, дужек, языка. Взятый материал помещают в пробирку с транспортной средой.

• Мазок из носа, уха берется стерильным зондом. Взятый материал помещают в пробирку с транспортной средой.

• Мазок с конъюнктивы глаза берется врачом-офтальмологом специальным глазным шпателем. Взятый материал помещают в пробирку с транспортной средой.

• Материал из уретры у мужчин берут стерильным зондом, производя соскоб на глубине 3-4 см. Взятый материал помещают в пробирку с транспортной средой.

• Материал из уретры у женщин берут стерильным зондом, вводимым на глубину 1,5‐2 см. Зонд с материалом помещается в пробирку с транспортной средой.

• Материал из цервикального канала шейки матки берут с помощью стерильного зонда, вводя его в цервикальный канал на 1-1,5 см, и, осторожно поворачивая, вынимают, не прикасаясь к стенкам влагалища, после чего помещают в транспортную среду. Материал, взятый в транспортные контейнеры со средами Эймса или Стюарта, хранится при комнатной температуре и доставляется в лабораторию в течение 1-2 суток с момента взятия.

Посев мочи на уропатогенную флору

Исследование микрофлоры мочи проводится в средней порции утренней мочи после тщательного туалета наружных половых органов. Мочу собирают в стерильный стакан с крышкой в количестве не менее 3-5 мл, и доставляют в лабораторию в течение 1,5-2 часов. Длительное хранение мочи при комнатной температуре до исследования приводит к изменению физических свойств, разрушению клеток и размножению бактерий, что может привести к ложноотрицательному или недостоверному результату исследования.

Взятие материала для исследования должно выполняться до начала приема антибиотиков и антибактериальных препаратов или проводиться в интервалах между курсами лечения. Нельзя сдавать мочу на посев женщинам во время месячных. Нельзя использовать для бактериологического исследования мочу из мочеприемника и подкладного судна.

Кал на дисбактериоз

Материалом для исследования на дисбактериоз кишечника служит утренний кал, помещённый в специальный контейнер с помощью мерной ложки, вмонтированной в крышку контейнера. Количество материала для исследования — примерно 2 г (3 лопатки). Если фекалии содержат слизь, кровяные или белые прожилки, предпочтительно именно этот участок брать в качестве материала для анализа. Взятый материал доставляется в лабораторию не позже 1,5 часов с момента дефекации.

Литература:
1. МУ 4.2.2039–­­­05 «Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории». Утверждены приказом главного санитарного врача 23.12.2005.
2. «Вестник “Лаборатории ДНК-Диагностики”», № 3 (12)/2011 год, стр. 15-17.

В материале даны общие рекомендации по взятию мазков из урогенитального тракта для микроскопических исследований. Просим тщательно соблюдать данные рекомендации для повышения точности исследования.

Приготовление мазка — это нанесение отделяемого, полученного с поверхностей слизистых оболочек, на предметное стекло. Микроскопическое исследование включает не только идентификацию эпителия, микроорганизмов и других морфологических частиц, но также оценку их количества и соотношения. Качество мазка зависит от физиологического состояния пациента на момент взятия мазка. Наиболее информативным может быть клинический материал, если он получен при следующих условиях:

• мазки взяты при наличии клинических признаков заболевания;

• пациент не использовал местного лечения минимум в течение последних 48–72 часов;

• у женщин при исследовании материалов из урогенитального тракта взятие образцов желательно проводить приблизительно в середине менструального цикла (если заболевание не имеет явных проявлений) или в дни, когда нет кровянистых выделений (при обострении процесса);

• у мужчин при исследовании материалов взятие образцов из уретры необходимо проводить при условии задержки мочеиспускания не менее 3–4 часов;

• пациент не принимал душ в течение 24 часов.

Перед взятием образца важно понимать, какой материал должен быть взят, и что предполагается обнаружить. Обычно во время обследования пациента необходимо брать несколько клинических образцов (не только для микроскопии, но также и для других лабораторных исследований). Важно помнить, что:

• Материал из уретры для микроскопического исследования берется раньше всех других уретральных образцов или сразу же после взятия выделений или проб для культурального исследования на гонококки.

• Материал для приготовления нативного мазка из влагалища берется раньше всех других вагинальных проб. Участок влагалища, с которого нужно взять пробу, зависит от клинической ситуации. Если имеются обильные выделения и подозревается трихомонадная или кандидозная инфекция, образец берется из заднего свода, где концентрация предполагаемого инфекционного агента наибольшая. Если количество выделений обычное, образец следует брать с боковой стенки влагалища. Этот клинический материал даст наиболее надежную информацию о состоянии влагалища в данный момент.

• Образец из шейки матки для микроскопического исследования берется раньше всех других цервикальных образцов или сразу же после взятия мазка для культурального исследования на гонококки.

• Предметные стекла должны быть сухими, чистыми, не поцарапанными (оптимально применять новые стекла для каждого нового пациента).

• Мазок наносится тонким слоем только на одну сторону предметного стекла.

• Если количество материала небольшое, или Вы хотите поместить на одно стекло несколько образцов материала из разных локализаций у одного пациента, материал должен наноситься ближе к центру стекла в заранее обозначенных областях.

• Физиологический раствор должен быть теплым (оптимально 37°С). Эта температура позволяет легче распознать подвижные трихомонады.

Клинический материал можно получать с помощью пластиковой бактериологической петли или ватного/дакронового тампона. Предпочтение во всех случаях следует отдавать дакроновым тампонам. При использовании бактериологической петли материал наносится на предметное стекло штриховыми движениями тонким слоем. Ватный/дакроновый тампон прокатывается по стеклу для перенесения материала. Все мазки, приготовленные для направления в лабораторию, должны быть высушены на воздухе, промаркированы и, при необходимости, зафиксированы.

Взятие материала для микроскопии нативных препаратов

Для микроскопии влажных нативных препаратов использует­ся отделяемое влагалища у женщин. У мужчин прямая микроско­пия влажных мазков проводится при наличии обильных выделе­ний из уретры с исследованием свободного отделяемого или смыва.

Вагинальный образец для приготовления влажного (нативного) мазка берется в зеркалах бактериологической петлей объемом 10 мкл с определенного анатомического участка (задний или бо­ковой свод). Материал из уретры берется бактериологической петлей объемом 1 мкл. Из препуциального мешка материал бе­рется ватным/дакроновым тампоном.

На предметное стекло помещается капля теплого физиологи­ческого раствора (оптимально 37°С). Вагинальные или уре­тральные выделения перемешиваются с каплей физиологиче­ского раствора, накрываются покровным стеклом и немедленно просматриваются с использованием светового микроскопа. Если врач не владеет методом прямой микроскопии, выделения поме­щаются в пробирку с теплым физиологическим раствором и не­медленно направляются в лабораторию для микроскопического исследования.

Взятие материала для микроскопии окрашенных препаратов у мужчин

Образец из уретры для окрашивания по Граму или метиленовым синим берется с помощью бактериологической петли объе­мом 1 мкл. У мужчин при наличии выделений из уретры поверх­ность головки и область наружного отверстия уретры должны быть очищены с помощью марлевого тампона, крайняя плоть отведена назад для предупреждения контаминации. При отсутст­вии свободных вьщелений необходимо попросить пациента слегка помассировать уретру скользящими движениями от основания пениса к его головке. В этом случае могут быть использованы ло­жечка Фолькмана или ватный/дакроновый тампон для взятия материала. После введения пластиковой петли в уретру на 1-2 см необходимо плоскость «глазка» петли двигать к отвер­стию, слегка нажимая на стенки уретры. Не рекомендуется вра­щать петлю во время процедуры взятия образца — для пациента это болезненно. После получения клинического материала петля накладывается на поверхность стекла и передвигается по нему несколько раз с легким нажатием. Петля должна оставить на стекле тонкую полоску клинического материала.

Образец из препуциального мешка берется ватным/дакроновым тампоном.

Взятие материала для микроскопии окрашенных препаратов у женщин

Образец из уретры для окрашивания по Граму или метиленовым синим берется с помощью бактериологической петли объе­мом 1 мкл. При наличии большого количества выделений наруж­ное отверстие должно быть очищено с помощью марлевого тампона. При отсутствии свободных выделений может быть про­веден легкий массаж уретры, выполняемый врачом. После введения пластиковой петли в уретру на 1-2 см необходимо плоскость «глазка» петли двигать к отверстию, слегка нажимая на заднюю и боковые стенки уретры. Не рекомендуется вращать петлю во время процедуры взятия образца — для пациентки это болезненно. После получения клинического материала петля накладывается на поверхность стекла и передвигается по нему несколько раз с легким нажатием. Петля должна оставить на стекле тонкую по­лоску клинического материала.

Образец из цервикального канала для приготовления окра­шенных препаратов берется в зеркалах ватным/дакроновым там­поном, специальной щеточкой или ложечкой Фолькмана. Необ­ходимо тщательно очистить наружное отверстие цервикального канала при помощи большого марлевого тампона от вагинальных выделений для предотвращения возможной контаминации. По­сле введения тампона в шеечный канал на 1-2 см его вращают несколько раз. Клинический материал должен быть перенесен с тампона на стекло как можно более тонким слоем.

Для микроскопического исследования окрашенных вагиналь­ных мазков материал берется в зеркалах с заднего или боковых сводов бактериологической петлей 10 мкл или ложечкой Фоль­кмана и тонким слоем распределяется на предметном стекле.

Взятие материала с шейки матки на онкоцитологию

Материал берется из двух отделов: с наружного зева (эктоцервикса) и цервикального канала (эндоцервикса) без предварительной обработки шейки матки тампоном с физиологическим раствором. Пользуются шпателем типа Эйра или любым другим, лучше специальной цитощеткой. Вращательными движениями при легком надавливании получают соскоб со всей поверхности шейки матки и цервикального канала одновременно. Шпателем или щеткой проводят по стеклу — получают две полосы: материал с шейки матки и цервикального канала. При наличии патологии шейки матки берут соскоб непосредственно с участка поражения. При лейкоплакии, эрозии, подозрении на рак необходимо приготовить не менее 2‐3 мазков. В этих случаях удобнее брать мазок под контролем кольпоскопа.

Помните, нельзя намазывать материал толстым слоем — в микроскоп видны только тонкие мазки. Участки с сильным «намазыванием» исключаются из исследования, т. к. невозможно качественно определить, что за тип клеток в получившемся месиве. С другой стороны, не наносите мазок с усилием, в этом случае клетки разрушаются, и в препарате не обнаруживается ничего, кроме обломков клеток.

Литература:
1. А. М. Савичева, Е. В. Соколовский, М. Домейка. Порядок проведения микроскопического исследования мазков из урогенитального тракта. Методические рекомендации для лечащих врачей.  — СПб: «Издательство Н-Л», 2007. — 60 с. (Серия Ex libris «Журнал акушерства и женских болезней»), ISBN 978-5-94869-040-7.
2. «Вестник “Лаборатории ДНК-Диагностики”», № 3 (12)/2011 год, стр. 5-7.